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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞

  • 產(chǎn)品型號:P-X1119
  • 產(chǎn)品**:派瑞曼
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡單介紹:
A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品:MC38+LUC小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記貼壁生長上皮細(xì)胞樣MC38+LUC:MC38LUC小鼠細(xì)胞系組織來源:結(jié)腸山羊CD14分子(CDl4)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測酵母菌SD-G培養(yǎng)基
詳情介紹:

細(xì)胞接收后的處理:


1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。

A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞


英文簡稱

規(guī)格

貨號

A7r5:A7r5

1×106

P-X1119

產(chǎn)品詳情:


生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 DMEM10% FBS1% P/S

凍存條件

凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;CO25%

溫度:37℃

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3/

背景描述 A7r5細(xì)胞培養(yǎng)到穩(wěn)定期后,表現(xiàn)出長高的肌激酶和肌氨酸磷酸激酶活性(CPK)A7r5細(xì)胞分裂終止后合成骨肉型CPK。

年齡(性別) 胚胎

組織來源 胸大動脈平滑肌

細(xì)胞類型 自發(fā)永生化細(xì)胞

生物等級 1

基因表達(dá)情況 myokinase; creatine phosphokinase (muscle isoenzyme); myosin

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1444 ECACC; 86050803

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。


一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜

。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

實(shí)驗(yàn)原理:


公司正在出售的產(chǎn)品:

HS3ST3A1蛋白抗體

顆粒細(xì)胞分化蛋白抗體

HS3ST3A1

腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白3相互作用蛋白1抗體  Anti-Abin-1/TNIP1

星形肌動蛋白抗體

C3orf37

ASTN2

3號染色體開放閱讀框37抗體

富含脯氨酸蛋白15抗體  Anti-PRR15

Myotrophin

核仁磷酸蛋白抗體  Anti-Nucleophosmin

Insulin(1D4)

抑基因SNF2β抗體  Anti-BRG-1/SMARCA4/SNF2 beta

DHX58蛋白抗體

豬胰島素單克隆抗體

DHX58

大鼠膽固醇24S-羥化酶(CYP46)elisa分析檢測試劑盒

軸突生長因子CD108抗體  Anti-Sema7A/CD108

CYP46 ELISA Kit

還原型輔酶Ⅱ氧化酶5/煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸抗體  Anti-NOX5

山羊Ⅰ型膠原C端肽(CTX-)elisa分析檢測試劑盒

ras癌基因家族Rab3a抗體  Anti-RAB3A

CTX-ELISAkit

磷酸化甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體  Anti-phospho-TRAP220/MED1(Thr1457)

[35S]Met細(xì)胞代謝標(biāo)記試劑盒

大鼠色胺酸羥化酶2(TPH2)elisa檢測試劑盒

豚鼠膽堿脂酶(CHE)elisa分析檢測試劑盒

A7r5大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞單線態(tài)氧氣(scavenging)活性熒光篩選試劑盒

電導(dǎo)鈣激活鉀通道蛋白2抗體

腦多巴胺神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體

KCNN2

ARMETL1

實(shí)驗(yàn)步驟:


1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。



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