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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:L6大鼠成肌細(xì)胞

  • 產(chǎn)品型號(hào):P-X1136
  • 產(chǎn)品**:派瑞曼
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡(jiǎn)單介紹:
L6大鼠成肌細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品:neuro-2a小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)神經(jīng)和阿米巴樣干細(xì)胞neuro-2a:neuro2a小鼠細(xì)胞系組織來源:腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤,神經(jīng)母細(xì)胞小鼠白介素10(IL-10)elisa檢測(cè)試劑盒倉鼠脂聯(lián)素,含C1Q和膠原域(ADIPOQ)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
詳情介紹:

細(xì)胞接收后的處理:


1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。

L6大鼠成肌細(xì)胞


英文簡(jiǎn)稱

規(guī)格

貨號(hào)

L6:L6

1×106

P-X1136

產(chǎn)品詳情:


生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 成肌細(xì)胞樣

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM10% FBS1% P/S

凍存條件

凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮

培養(yǎng)條件

氣相:空氣,95%;CO2,5%

溫度:37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3/

背景描述 L6成肌細(xì)胞是由Yaffe從甲基膽蒽存在下大鼠大腿肌的原代培養(yǎng)物初兩代中分離得到。L6細(xì)胞在培養(yǎng)基中可融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維。L6細(xì)胞融合的程度隨著代數(shù)的增加而下降;因而,L6細(xì)胞應(yīng)冷凍于低代次階段并周期性地重新克隆以選擇融合能力強(qiáng)的細(xì)胞。如果讓培養(yǎng)容器中的細(xì)胞長(zhǎng)滿,L6細(xì)胞的成肌組分將迅速耗盡。

組織來源 骨胳??;成肌細(xì)胞

細(xì)胞類型 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

生物等級(jí) 1

基因表達(dá)情況 myosin

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1458 BCRJ; 0141

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。


一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜

。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

實(shí)驗(yàn)原理:


公司正在出售的產(chǎn)品:

eIF2Bγ蛋白抗體 EIF2B3

衰老相關(guān)Sigma受體蛋白抗體 OPRS1

FAM126B蛋白抗體 FAM126B

組蛋白去乙?;?span>6重組兔單克隆抗體 HDAC6

磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MARK1抗體 phospho-MARK1 (Thr215)

PE標(biāo)記人CD269 (BCMA)單克隆抗體 human CD269 (BCMA)/PE

磷酸化血管**素受體2抗體 Phospho-Tie2 (Tyr992)

PE-Cy5標(biāo)記小鼠CD44單克隆抗體 mouse CD44/PE-Cy5

17β羥類固醇脫氫酶7抗體 HSD17B7

絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SRPK2抗體 SRPK2

紅細(xì)胞蛋白Ank1抗體 Ankyrin-1

雄受體單克隆抗體

環(huán)指蛋白70抗體 RNF70

促甲狀腺素β亞單位抗體 TSHB

鋅指蛋白93抗體 ZNF93

蛋白BOC抗體 Protein BOC

NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒

ENOX1蛋白抗體 ENOX1

小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)elisa檢測(cè)試劑盒

FAM19A3蛋白抗體 FAM19A3

大鼠硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)elisa檢測(cè)試劑盒

磷酸化糖原合酶激酶3β抗體 phospho-GSK-3 Beta (Ser21)

細(xì)胞INSULIN R-ALPHA 蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒

磷酸化轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體 phospho-TRIM28 (Ser473)

小鼠葡萄糖激酶(GCK)elisa分析檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞肌酸激酶工酶混合型(CK-MB)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

大鼠胱硫醚β-合酶(CBS)elisa檢測(cè)試劑盒

L6大鼠成肌細(xì)胞人肝臟甘油三脂脂肪酶(HTGL)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

CC趨化因子受體2(CCR2)elisa分析檢測(cè)試劑盒

小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)elisa分析檢測(cè)試劑盒

植物丙二醛(MDA)比色法定量檢測(cè)試劑盒

大鼠白介素2IL2elisa檢測(cè)試劑盒

實(shí)驗(yàn)步驟:


1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。



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