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ELISA試劑盒主要操作步驟技巧

日期:2024-10-08 18:08
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摘要: ELISA試劑盒主要操作步驟技巧: 1加樣: ①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差; ②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑; ③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。 2.溫育: ①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件; ②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察; ③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)",因此盡量采用水浴...

ELISA試劑盒主要操作步驟技巧:

1加樣:

①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;

②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;

③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。

2.溫育:

①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件;

②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;

③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)",因此盡量采用水浴;

3.洗板:

①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;

②洗板機(jī)洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;

③為了洗滌效果好,實驗室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù);

4.顯色:

ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。

5.判定:

讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。